Blood DNA Kit培养细胞DNA提取试剂盒（离心柱型）

使用说明书

【产品名称】

通用名称：Blood DNA Kit培养细胞DNA提取试剂盒（离心柱型）

商品名称：Blood DNA Kit培养细胞DNA提取试剂盒（离心柱型）
 型号：ZT-009

 【预期用途】

      本试剂盒采用可以特异性结合DNA的离心吸附柱和独特的缓冲液系统，提取培养细胞中的DNA。离心吸附柱中采用的硅基质材料可高效、专一吸附DNA，结合独特的缓冲液系统可最大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。提取的基因组DNA片段完整，纯度高，质量稳定可靠。使用本试剂盒纯化的DNA适用于酶切、PCR、文库构建、Southern杂交等各种常规实验，和芯片杂交、高通量测序等高质量DNA需求的实验。

 【检验原理】 

1.可从培养的细胞中直接提取DNA（包括基因组DNA，病毒DNA，线粒体DNA），样本可以是新鲜或冷冻的。

2.高质量：独特的裂解缓冲体系，纯化的DNA具有高浓度，高纯度，完整性好等特点，满足芯片杂交，高通量测序等实验需求。

3.快速无毒：采用硅胶膜吸附原理，无需酚氯仿，1 h内即可完成实验。

4.提取DNA量：从5e6个培养细胞（具有正常染色体组）中最大可获得50μg DNA。

注意事项（请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项）：

1．样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA片段较小、提取量下降。提取样本需要平衡至室温。

2．若裂解液3中有沉淀，可在70℃水浴中重新溶解，摇匀后使用。

3．所有离心步骤均为室温下离心。

4．洗脱液3平衡至室温。

 【主要组成成份】

客户需自行准备物品包括：96~100%乙醇、PBS、带滤芯枪头、可加热至58℃的金属浴、离心机（可放入1.5ml和2ml离心管）、旋涡振荡仪。

 【储存条件及有效期】

该试剂盒置于室温（15~25℃）干燥条件下，可保存12个月。如果室温超过25℃，蛋白酶和吸附柱1可置于2~8℃保存。

 【试剂准备】

使用前先在洗液3和洗液4中加入96~100%乙醇，洗液3瓶中加入17ml 96~100%乙醇；洗液4瓶中加入21ml 96~100%乙醇。蛋白酶瓶中加入1.5ml蛋白酶溶解液溶解（溶解后的蛋白酶至于2-8℃保存）。

 【样本准备】

1.收集细胞方法1：悬浮生长的细胞确定细胞数后（不要超过5e6个细胞），在1.5ml离心管中300g离心5分钟，去除上清液，注意不要打扰细胞沉淀。

2.收集细胞方法2：单层生长的细胞通过胰蛋白酶消化或使用细胞刮刀从培养物中分离出来。胰蛋白酶消化细胞：确定细胞数后。吸出培养基并用PBS洗涤细胞。然后吸出PBS，并加入0.10-0.25％胰蛋白酶。细胞脱离后，收集它们，并转移适当数量的细胞（不要超过5e6个细胞）到1.5ml离心管。在300g离心5分钟。去除上清液，注意不要打扰细胞沉淀。

3.使用细胞刮刀：从培养皿或烧瓶中取出细胞。转移适当数量的细胞（不要超过5e6个细胞）至1.5ml离心管并在300g离心5分钟。除去上清液，注意不要打扰细胞沉淀。

4.任选上述2种收集细胞方法之一收集细胞，重悬在200 μlPBS。

5.加入25μl蛋白酶混匀。然后从以下提取步骤开始操作。

 【操作步骤】

1.加入200 μl裂解液3并漩涡振荡混匀15秒。

注意：不能直接将蛋白酶加入裂解液3。

注意：如果样本量大于200μL，可按比例加大蛋白酶和裂解液3的用量；例如400 μl样本则需加50μl蛋白酶和400μl裂解液3。

2.58℃温浴10分钟。注意：更长时间的温浴不影响提取的DNA产量和质量。

3.瞬时离心，加200μl 96-100%乙醇，漩涡混匀15秒。

注意：如果室温超过25°C，在冰上冷却乙醇，再加入到管中。如果样本量大于200μL，可按比例加大96-100%乙醇的用量；例如400 μl样本则需加400μl 96-100%乙醇。

4.瞬时离心，加入吸附柱中，6000g以上的速度离心1分钟，将吸附柱放置在干净的2 ml收集管中，弃去含有流出液的收集管。

注意：6000g离心只是会降低噪音，以更高速度离心不影响DNA提取。

5.加入500μl洗液3（以加乙醇）6000g的速度离心1分钟，将吸附柱放置在干净的2 ml收集管中，弃去含有流出液的收集管。

6.加入500μl洗液4（以加乙醇）20000g的速度离心3分钟，将吸附柱放置在干净的2 ml收集管中，弃去含有流出液的收集管。

7.建议步骤：20000g的速度离心1分钟。

8.换新离心管，向吸附膜中间位置悬空滴加50μl -200μl洗脱液3，室温温浴5分钟，6000g的速度离心1分钟。注意：如果用200μl洗脱液3重复洗脱一次，这将增加DNA回收率（最多增加15%）。对于DNA含量小于1μg的样品，建议用50μl洗脱液3洗脱。用2 x 100μL代替1×200μL洗脱不会增加洗脱效率。若提取产物需要长期存储，建议存储在–30°C到–15°C。