Blood DNA Kit口腔拭子DNA提取试剂盒（离心柱型）

使用说明书

【产品名称】

通用名称：Blood DNA Kit口腔拭子DNA提取试剂盒（离心柱型）

商品名称：Blood DNA Kit口腔拭子DNA提取试剂盒（离心柱型）
  

 【预期用途】

      本试剂盒采用可以特异性结合DNA的离心吸附柱和独特的缓冲液系统，提取口腔拭子样品中的DNA。离心吸附柱中采用的硅基质材料可高效、专一吸附DNA，结合独特的缓冲液系统可最大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。提取的基因组DNA片段完整，纯度高，质量稳定可靠。使用本试剂盒纯化的DNA适用于酶切、PCR、文库构建、Southern杂交等各种常规实验，和芯片杂交、高通量测序等高质量DNA需求的实验。
  

【检验原理】 

     1.用于口腔拭子DNA提取，样本可以是新鲜或冷冻的。

2.高质量：独特的裂解缓冲体系，纯化的DNA具有高浓度，高纯度，完整性好等特点，满足芯片杂交，高通量测序等实验需求。

3.快速无毒：采用硅胶膜吸附原理，无需酚氯仿，1 h内即可完成实验。

注意事项（请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项）：

1.样品应避免反复冻融否则会导致提取的DNA片段较小、提取量下降。提取样本需要平衡至室温。

2．若裂解液3中有沉淀，可在70℃水浴中重新溶解，摇匀后使用。

3．所有离心步骤均为室温下离心。

4．RNA会抑制一些下游酶反应，但不会抑制PCR，如需去除RNA残留，需自备RNase A（100 mg/ml）溶液。

5．洗脱液3平衡至室温。
  

【主要组成成份】

选配试剂：

裂解液3（规格11mL），若试剂盒用于提取Whatman Bioscience的Omni Swab，则裂解液3不够使用，需另外购买。

客户需自行准备物品包括：96~100%乙醇、RNase A（100 mg/ml）、PBS、带滤芯枪头、可加热至58℃的金属浴、离心机（可放入1.5ml和2ml离心管）、旋涡振荡仪。

 【储存条件及有效期】

该试剂盒置于室温（15~25℃）干燥条件下，可保存12个月。如果室温超过25℃，蛋白酶和吸附柱1可置于2~8℃保存。

 【试剂准备】

使用前先在洗液3和洗液4中加入96~100%乙醇，洗液3瓶中加入17ml 96~100%乙醇；洗液4瓶中加入21ml 96~100%乙醇。蛋白酶瓶中加入1.5ml蛋白酶溶解液溶解（溶解后的蛋白酶至于2~8℃保存）。

 【样本要求】

口腔拭子取样：将拭子牢牢地粘在口腔内侧脸颊部位刮擦6次。收集后至少将拭子风干2小时。确保提供样品的人在样品收集前30分钟内没有食用任何食物或饮料。

 【操作步骤】

1.将拭子放入2ml离心管，加入400μl PBS或600μl（Whatman Bioscience的Omni Swab）PBS和25μl蛋白酶，若想去除RNA，则还需要在加入4μl RNase A（100 mg/ml）。

2.加入400 μl或600μl（Whatman Bioscience的Omni Swab）裂解液3并漩涡振荡混匀15秒。

注意：不能直接将蛋白酶加入裂解液3。

3.58℃温浴10分钟。瞬时离心，加400μl或600μl（Whatman Bioscience的Omni Swab）96~100%乙醇，漩涡混匀15秒。

注意：如果室温超过25°C，在冰上冷却乙醇，再加入到管中。

4.瞬时离心，加入吸附柱中，6000g以上的速度离心1分钟，将吸附柱放置在干净的2 ml收集管中，弃去含有流出液的收集管。

注意：6000g离心只是会降低噪音，以更高速度离心不影响DNA提取。吸附柱一次只能加700μl溶液，若溶液体积比较大，可分几次上柱离心。

5.加入500μl洗液3（以加乙醇）6000g的速度离心1分钟，将吸附柱放置在干净的2 ml收集管中，弃去含有流出液的收集管。

6.加入500μl洗液4（以加乙醇）20000g的速度离心3分钟，将吸附柱放置在干净的2 ml收集管中，弃去含有流出液的收集管。

7.建议步骤：20000g的速度离心1分钟。

8.换新离心管，向吸附膜中间位置悬空滴加100μl -150μl洗脱液3，室温温浴2分钟，6000g的速度离心1分钟。

注意：若提取产物需要长期存储，建议存储在–30°C~15°C。