Blood DNA Kit干血斑基因组DNA提取试剂盒（柱提型）

使用说明书

【产品名称】

通用名称：Blood DNA Kit干血斑基因组DNA提取试剂盒（柱提型）

商品名称：Blood DNA Kit干血斑基因组DNA提取试剂盒（柱提型）
 型号：ZT-008

 【预期用途】

本试剂盒采用可以特异性结合核酸的离心吸附柱和独特的缓冲液系统，可从滤纸上的干血斑（抗凝或未抗凝）中直接提取DNA（包括基因组DNA，病毒DNA，线粒体DNA）。离心吸附柱中采用的硅基质材料可高效、专一吸附核酸，结合独特的缓冲液系统可最大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。提取的核酸片段完整，纯度高，质量稳定可靠。使用本试剂盒纯化的核酸适用于酶切、PCR、文库构建、Southern杂交等各种常规实验，和芯片杂交、高通量测序等高质量核酸需求的实验。本产品预期是由专业人员使用，如经过分子生物学技术培训的技术人员和医生。
  

【检验原理】 

     1.样本：可从滤纸上的干血斑（抗凝或未抗凝）中直接提取DNA（包括基因组DNA，病毒DNA，线粒体DNA）。

2.高质量：独特的裂解缓冲体系，纯化的DNA具有高浓度，高纯度，完整性好等特点，满足芯片杂交，高通量测序等实验需求。

3.快速无毒：采用采用硅胶膜吸附原理，无需酚氯仿。
  

注意事项（请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项）：

1．样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA片段较小、提取量下降。

2．若裂解液1，裂解液3中有沉淀，可在70℃水浴中重新溶解，摇匀后使用。

3．洗脱液3平衡至室温。

4．所有离心步骤均为室温下离心。

5．在冷的表面（例如置于干冰块上方的玻璃板、钢板或铝板）制备组织样本。

6．如果使用冷冻的组织，确保在加入裂解液1之前，冰冻样本未溶化。

【主要组成成份】

客户需自行准备物品包括：96~100%乙醇、带滤芯枪头、可加热至58°C/85°C/70℃且可混匀的金属浴、离心机（可放入1.5ml和2ml离心管）、旋涡振荡仪。
  

【储存条件及有效期】

该试剂盒置于室温（15~25℃）干燥条件下，可保存12个月。如果室温超过25℃，吸附柱1和蛋白酶可置于2-8℃保存。
  

【试剂准备】

使用前先在洗液3和洗液4中加入96~100%乙醇，洗液3瓶中加入17ml 96~100%乙醇；洗液4瓶中加入21ml 96~100%乙醇。蛋白酶瓶中加入1.5ml蛋白酶溶解液溶解（溶解后的蛋白酶至于2~8℃保存）。
  

【操作步骤】

1.用打孔机从干血斑滤纸上切下3片直径3mm的圆片，放入1.5ml离心管，加入180 μl裂解液1。

2.85°C温浴10分钟。

3.瞬时离心，加20μl蛋白酶，充分混匀，58℃边混匀边温浴1小时。

4.瞬时离心，加入200 μl裂解液3，充分混匀，70℃边混匀边温浴10分钟。

5.瞬时离心，加入200 μl乙醇（96-100%），盖上盖子，充分混匀。

注意：如果室温超过25°C，在冰上冷却乙醇，再加入到管中。

6.瞬时离心，加入吸附柱中，6000g以上的速度离心1分钟，将吸附柱放置在干净的2 ml收集管中，弃去含有流出液的收集管。注意：6000g离心只是会降低噪音，以更高速度离心不影响DNA提取。

7.加入500μl洗液3（以加乙醇）6000g的速度离心1分钟，将吸附柱放置在干净的2 ml收集管中，弃去含有流出液的收集管。

8.加入500μl洗液4（以加乙醇）20000g的速度离心3分钟，将吸附柱放置在干净的2 ml收集管中，弃去含有流出液的收集管。

9.建议步骤：20000g的速度离心1分钟。

10.换新离心管，向吸附膜中间位置悬空滴加150μl洗脱液3，室温温浴1分钟，6000g的速度离心1分钟。

注意：3片直径3mm的圆片，若是抗凝血可提取约150ng DNA，若是未抗凝血可提取约75ng DNA，假如未抗凝血提取产量不足，可将圆片数量加到6。提取产物用于PCR扩增时，模板用量不要超过反应体系总体积的10%。