Blood DNA Kit组织基因组DNA提取试剂盒（柱提型）

使用说明书

【产品名称】

通用名称：Blood DNA Kit组织基因组DNA提取试剂盒（柱提型）

商品名称：Blood DNA Kit组织基因组DNA提取试剂盒（柱提型）

型号：ZT-006
 【预期用途】

      本试剂盒采用可以特异性结合核酸的离心吸附柱和独特的缓冲液系统，提取组织样品中的核酸。离心吸附柱中采用的硅基质材料可高效、专一吸附核酸，结合独特的缓冲液系统可最大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。提取的核酸片段完整，纯度高，质量稳定可靠。使用本试剂盒纯化的核酸适用于酶切、PCR、文库构建、Southern杂交等各种常规实验，和芯片杂交、高通量测序等高质量核酸需求的实验。本产品预期是由专业人员使用，如经过分子生物学技术培训的技术人员和医生。

 【检验原理】

   1.样本：可从组织，中直接提取DNA（包括基因组DNA，线粒体DNA），样本可以是新鲜或冷冻的。

2.高质量：独特的裂解缓冲体系，纯化的DNA具有高浓度，高纯度，完整性好等特点，满足芯片杂交，高通量测序等实验需求。

3.快速无毒：采用采用硅胶膜吸附原理，无需酚氯仿。

注意事项（请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项）：

1．样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA片段较小、提取量下降。

2．若裂解液1，裂解液3中有沉淀，可在70℃水浴中重新溶解，摇匀后使用。

3．RNA会抑制一些下游酶反应，但不会抑制PCR，如需去除RNA残留，需自备RNase A（100 mg/ml）溶液。

4．洗脱液3平衡至室温。

5．所有离心步骤均为室温下离心。

6．在冷的表面（例如置于干冰块上方的玻璃板、钢板或铝板）制备组织样本。

7．如果使用冷冻的组织，确保在加入裂解液1之前，冰冻样本未溶化。

 【主要组成成份】

客户需自行准备物品包括：96~100%乙醇、RNase A（100 mg/ml）、带滤芯枪头、可加热至58°C/70°C且可混匀的金属浴、离心机（可放入1.5ml和2ml离心管）、旋涡振荡仪。

 【储存条件及有效期】

该试剂盒置于室温（15~25℃）干燥条件下，可保存12个月。如果室温超过25℃，吸附柱1和蛋白酶可置于2~8℃保存。

 【试剂准备】

使用前先在洗液3和洗液4中加入96~100%乙醇，洗液3瓶中加入17ml 96~100%乙醇；洗液4瓶中加入21ml 96~100%乙醇。蛋白酶瓶中加入1.5ml蛋白酶溶解液溶解（溶解后的蛋白酶至于2~8℃保存）。

 【样本准备】

组织样本（新鲜或冰冻的）前处理：

1.新鲜的组织样本可以切成小块保存于-20℃或-80℃。

2.取一定量的组织样本（25mg左右，脾脏组织取10mg左右），从以下三种方法中选择一种处理（b,c这2种方法样本裂解时间会少于a）：a.将组织切成小块，加入220μl裂解液1和25μl蛋白酶; b.将组织放入液氮中，并用研钵和杵彻底研磨。然后将组织粉末和液氮倒入1.5毫升微量离心管。让液氮蒸发（但不允许解冻组织），并加入220μl裂解液1和25μl蛋白酶；c.将组织和80μl PBS加入匀浆器匀浆，组织匀浆后加入140μl裂解液1和25μl蛋白酶。

注意：一些组织需要用不稀释的裂解液1来充分裂解，这种情况建议用方法b；DNA的产量取决于处理的组织的数量和类型。1毫克的组织将产生大约0.2-1.2微克的DNA。

3.然后放在可漩涡振荡的温浴器上58℃温浴并900rpm振荡混匀，直到组织彻底溶解（大多数情况3小时内可彻底溶解，有时候可能需要过夜，过夜裂解能获得最佳的结果）。

4.瞬时离心，加入4μl RNase A（100 mg/ml）室温（15-25℃）温浴2分钟；若不需去除RNA，此步不用做直接跳至下一步。

5.若依然有不溶物存在，则3000g离心1分钟，取上清提取核酸。

 【操作步骤】

1.上述上清中加入245 μl裂解液3，充分混匀，70℃温浴10分钟。

2.瞬时离心，加入245 μl乙醇（96-100%），盖上盖子，涡旋振荡混合15秒。在室温（15–25°C）下孵育5分钟。

注意：如果室温超过25°C，在冰上冷却乙醇，再加入到管中。

3.瞬时离心，加入吸附柱中，6000g以上的速度离心1分钟，将吸附柱放置在干净的2 ml收集管中，弃去含有流出液的收集管。注意：6000g离心只是会降低噪音，以更高速度离心不影响DNA提取。

4.加入500μl洗液3（以加乙醇）6000g的速度离心1分钟，将吸附柱放置在干净的2 ml收集管中，弃去含有流出液的收集管。

5.加入500μl洗液4（以加乙醇）20000g的速度离心3分钟，将吸附柱放置在干净的2 ml收集管中，弃去含有流出液的收集管。

6.建议步骤：20000g的速度离心1分钟。

7.换新离心管，向吸附膜中间位置悬空滴加200μl洗脱液3，室温温浴1分钟，6000g的速度离心1分钟。

8.重复第7步。

注意：离心前室温温浴5分钟可增加DNA产量；如果用200μl洗脱液3进行第3次洗脱，这将增加DNA回收率（最多增加15%）。用4x 100μL代替2×200μL洗脱不会增加洗脱效率。若提取产物需要长期存储，建议存储在–30°C~ -15°C。