Blood DNA Kit血液基因组DNA提取试剂盒（离心柱型）

使用说明书

【产品名称】

通用名称：Blood DNA Kit血液基因组DNA提取试剂盒（离心柱型）

商品名称：Blood DNA Kit血液基因组DNA提取试剂盒（离心柱型）

型号：ZT-001
 【预期用途】

     本试剂盒采用可以特异性结合DNA的离心吸附柱和独特的缓冲液系统，提取血液等样品中的DNA。离心吸附柱中采用的硅基质材料可高效、专一吸附DNA，结合独特的缓冲液系统可最大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。提取的基因组DNA片段完整，纯度高，质量稳定可靠。使用本试剂盒纯化的DNA适用于酶切、PCR、文库构建、Southern杂交等各种常规实验，和芯片杂交、高通量测序等高质量DNA需求的实验。

 【检验原理】

     1.样本适用广泛：可从全血（柠檬酸盐，肝素或EDTA抗凝），血浆，血清，白膜层，其他体液，淋巴细胞中直接提取DNA（包括基因组DNA，病毒DNA，线粒体DNA），样本可以是新鲜或冷冻的。

2.高质量：独特的裂解缓冲体系，纯化的DNA具有高浓度，高纯度，完整性好等特点，满足芯片杂交，高通量测序等实验需求。

3.快速无毒：采用硅胶膜吸附原理，无需酚氯仿，1 h内即可完成实验。

4.提取DNA量：从200μl人全血平均可获得6μg DNA（3-12μg）。从200μl白膜层/5e6个淋巴细胞中最大可获得50μg DNA。

注意事项（请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项）：

1．样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA片段较小、提取量下降。提取样本需要平衡至室温。

2．若裂解液3中有沉淀，可在70℃水浴中重新溶解，摇匀后使用。

3．所有离心步骤均为室温下离心。

4．RNA会抑制一些下游酶反应，但不会抑制PCR，如需去除RNA残留，需自备RNase A（100 mg/ml）溶液。

5．洗脱液3平衡至室温。

 【主要组成成份

客户需自行准备物品包括：96~100%乙醇、RNase A（100 mg/ml）、PBS、带滤芯枪头、可加热至58°C的金属浴、离心机（可放入1.5ml和2ml离心管）、旋涡振荡仪。

 【储存条件及有效期】

该试剂盒置于室温（15~25℃）干燥条件下，可保存12个月。如果室温超过25℃，蛋白酶和吸附柱1可置于2-8℃保存。

 【试剂准备】

使用前先在洗液3和洗液4中加入96~100%乙醇，洗液3瓶中加入17ml 96~100%乙醇；洗液4瓶中加入21ml 96~100%乙醇。蛋白酶瓶中加入1.5ml蛋白酶溶解液溶解（溶解后的蛋白酶至于2~8℃保存）。

 【样本准备】

白膜层制备：than an equivalent volume of whole blood.新鲜全血（抗凝）室温（15~25℃）2500g离心10分钟，离心后分成3个部分，上部透明层是血浆，中间层即是白膜层，下层是红细胞。取出白膜层按以下操作步骤开始操作。

注意：白膜层是全血中的白细胞富集后形成。制备白膜层步骤很简单，相比等量的全血白膜层DNA产率约是全血的5~10倍。

 【操作步骤】

1.取1.5ml离心管，加入25μl蛋白酶。

2.加入200 μl样本（全血/血浆/血清/白膜层/含有最多5e6个淋巴细胞的PBS/其他体液）并混匀，若样本不足200 μl用PBS补足。若想去除RNA，则还需要在加入4μl RNase A（100 mg/ml）。

3.加入200 μl裂解液3并漩涡振荡混匀15秒。注意：不能直接将蛋白酶加入裂解液3。

注意：如果样本量大于200μL，可按比例加大蛋白酶和裂解液3的用量；例如400 μl样本则需加50μl蛋白酶和400μl裂解液3。

4.58℃温浴10分钟。

注意：更长时间的温浴不影响提取的DNA产量和质量。

5.瞬时离心，加200μl 96-100%乙醇，漩涡混匀15秒。

注意：如果室温超过25°C，在冰上冷却乙醇，再加入到管中。如果样本量大于200μL，可按比例加大96-100%乙醇的用量；例如400 μl样本则需加400μl 96-100%乙醇。

6.瞬时离心，加入吸附柱中，6000g以上的速度离心1分钟，将吸附柱放置在干净的2 ml收集管中，弃去含有流出液的收集管。

注意：6000g离心只是会降低噪音，以更高速度离心不影响DNA提取。另外样本为白膜层或含有最多5e6个淋巴细胞的PBS时，建议用最大速度离心以避免堵塞吸附柱。

7.加入500μl洗液3（以加乙醇）6000g的速度离心1分钟，将吸附柱放置在干净的2 ml收集管中，弃去含有流出液的收集管。

8.加入500μl洗液4（以加乙醇）20000g的速度离心3分钟，将吸附柱放置在干净的2 ml收集管中，弃去含有流出液的收集管。

9.建议步骤：20000g的速度离心1分钟。

10换新离心管，向吸附膜中间位置悬空滴加50μl -200μl洗脱液3，室温温浴1分钟，6000g的速度离心1分钟。

 注意：离心前室温温浴5分钟可增加DNA产量；如果用200μl洗脱液3重复洗脱一次，这将增加DNA回收率（最多增加15%）。对于DNA含量小于1μg的样品，建议用50μl洗脱液3洗脱。用2 x 100μL代替1×200μL洗脱不会增加洗脱效率。若提取产物需要长期存储，建议存储在–30°C~–15°C。